实验的具体步骤：细胞接种及处理、黏附率检测。

1、细胞接种

（1）将实验细胞进行处理，用胰酶消化后，用 PBS 洗涤后，收集到离心管中 1 000 rpm、5 min 并用相应的细胞培养基重悬，制成细胞悬液。

（2）按每孔 5 × 104 细胞接种 96 孔板（具体细胞接种数目依据细胞特性和实验目的进行调整，检测前对照组细胞数量达到 80~90%），建议设置 3~5 个复孔。同时设立对照组、药物处理组、空白对照组。对照组即溶剂处理组，空白对照组为不含细胞且更换正常细胞培养基，其他处理一致。

（3）将细胞放 37 ℃ 培养箱孵育培养 24 h，依照实验目的分别处理对照组和药物处理组，后进行荧光染色观察不同组别荧光强度。

2、粘附率检测

（1）工作液的配制，从冰箱取出荧光染色（钙黄绿素）试剂，加入 DMSO 制成储存液。并按照所测样品用量加入粘附测定缓冲液制成工作液，储存液可以 -20 ℃ 下保存。

（2）取出细胞培养板，吸弃培养基。并用 PBS 洗涤 2~3 次后，加入每孔加入 100 μL 钙黄绿素工作溶液，孵育培养 20~30 min 后，去除上清液后，加入 PBS 清洗细胞。

（3）用荧光酶标仪检测结果。最大激发波长 488 nm，最大发射波长分别为 520 nm。

（4）细胞粘附率计算。将各测试孔的荧光强度值减去空白孔（未加细胞孔）荧光强度值。各重复孔的荧光强度值取平均数。

细胞粘附率 =（（F 药物处理细胞 - F 空白）/（F 对照细胞 - F 空白））× 100%